Link tải luận văn miễn phí cho ae
CÁCH XÁC ðỊNH HOẠT ðỘ PROTEASE
TS. Phạm Quang Chinh, PGS.TS.Biền Văn Minh
Protease là enzyme ñược sử dụng nhiều nhất hiện nay trong một số ngành sản
xuất như: chế biến thực phẩm, sản xuất chất tẩy rửa, thuộc da, y tế, nông nghiệp…
Nguồn protease có nhiều ở một số loại quả như dứa (Ananas cocosus L.), ñu ñủ
(Carica papaya L.), vả (Ficus auriculata Lour.)… và nhiều vi sinh vật như vi khuẩn,
nấm mốc và xạ khuẩn… Trong bài viết này, chúng tui xin trao ñổi về cách xác ñịnh
hoạt ñộ protease từ quả ñu ñủ và nấm mốc Aspergillus oryzae.
1. Hóa chất và dụng cụ
- Quả ñu ñủ, nấm mốc Aspergillus oryzae.
- Dung dịch tartaric acid 1%; dung dịch trichloacetic acid 0,3M; dung dịch casein 2%;
dung dịch ñệm Britton và Robinson (acetic acid, phosphoric acid, boric acid); dung dịch HCl
0,2N; dung dịch tyrosine 1 mM; dung dịch Folin.
- công cụ thủy tinh (bình tam giác, ống nghiệm, pipete…)
- Tủ ấm, bếp ñun cách thủy
- Máy so màu.
2. Nguyên tắc
Dùng dịch chiết quả có enzyme thủy phân protein. Sau ñó diệt enzyme và kết tủa
protein chưa bị thủy phân bằng trichloacetic acid. ðịnh lượng sản phẩm ñược tạo thành trong
phản ứng bằng phản ứng màu với thuốc thử Folin, kết quả phân tích dựa vào ñồ thị chuẩn
tyrosine.
ðơn vị hoạt ñộ protease là lượng enzyme phân giải protein tạo thành các sản phẩm hòa
tan trong trichloacetic acid tương ứng với một micromol tyrosine (0,181 mg) trong một phút,
ở 300C.
Protease của dịch chiết quả ñược xác ñịnh ở pH 7,2 ± 0,2.
3. Các bước tiến hành
a. Chuẩn bị dung dịch ñệm Britton và Robinson pH 7,2
- Dung dịch A: Acetic acid 0,04M (2,32 ml pha thành 1000 ml), phosphoric acid 0,04M,
boric acid 0,04M.
- Dung dịch B: 8g NaOH hòa tan trong nước cất và dẫn nước ñến 1000 ml.
- Dung dịch ñệm Britton và Robinson có pH khác nhau phụ thuộc vào tỉ lệ pha thể tích
dung dịch A và B. Pha ñệm pH 7,2: lấy 100 ml dung dịch A và 55 ml dung dịch B, dẫn nước
cất ñến 200 ml.
b. Dung dịch casein 2%
Hòa tan 2g casein vào 90 ml ñệm Britton và Robinson pH 7,2. Nếu pH của dung dịch
thấp hơn 7,2 thì dùng vài giọt NaOH 1N ñể ñiều chỉnh, dẫn ñệm ñến 100 ml.
c. Dung dịch enzyme
- Cân 1g ñu ñủ, nghiền với ñệm Britton và Robinson pH 7,2. ðổ dịch nghiền vào bình
ñịnh mức loại 100 ml. Dùng ñệm rửa cối chày, nước rửa cho vào bình ñịnh mức. Bổ sung ñệm
ñến vạch ngấn. Lắc ñều, lọc lấy dịch trong.
- Chuẩn bị dịch enzyme từ dịch lên men vi nấm A. oryzae : Nuôi cấy A. oryzae trong
môi trường dịch thể Czapek−Dox vô trùng (saccharose 30g; NaNO3 3,5g; K2HPO4 1,5g;
MgSO4 0,5g; KCl 0,5g; FeSO4 0,01g rồi thêm 20 ml sữa ñặc hay 10g gelatin, hay casein,
nước cất 1000 ml) trong ñiều kiện nhiệt ñộ phòng trên máy lắc 200 vòng/phút sau 72 giờ thu
lấy dịch lọc.
Do Drive thay đổi chính sách, nên một số link cũ yêu cầu duyệt download. các bạn chỉ cần làm theo hướng dẫn.
Password giải nén nếu cần: ket-noi.com | Bấm trực tiếp vào Link để tải:
CÁCH XÁC ðỊNH HOẠT ðỘ PROTEASE
TS. Phạm Quang Chinh, PGS.TS.Biền Văn Minh
Protease là enzyme ñược sử dụng nhiều nhất hiện nay trong một số ngành sản
xuất như: chế biến thực phẩm, sản xuất chất tẩy rửa, thuộc da, y tế, nông nghiệp…
Nguồn protease có nhiều ở một số loại quả như dứa (Ananas cocosus L.), ñu ñủ
(Carica papaya L.), vả (Ficus auriculata Lour.)… và nhiều vi sinh vật như vi khuẩn,
nấm mốc và xạ khuẩn… Trong bài viết này, chúng tui xin trao ñổi về cách xác ñịnh
hoạt ñộ protease từ quả ñu ñủ và nấm mốc Aspergillus oryzae.
1. Hóa chất và dụng cụ
- Quả ñu ñủ, nấm mốc Aspergillus oryzae.
- Dung dịch tartaric acid 1%; dung dịch trichloacetic acid 0,3M; dung dịch casein 2%;
dung dịch ñệm Britton và Robinson (acetic acid, phosphoric acid, boric acid); dung dịch HCl
0,2N; dung dịch tyrosine 1 mM; dung dịch Folin.
- công cụ thủy tinh (bình tam giác, ống nghiệm, pipete…)
- Tủ ấm, bếp ñun cách thủy
- Máy so màu.
2. Nguyên tắc
Dùng dịch chiết quả có enzyme thủy phân protein. Sau ñó diệt enzyme và kết tủa
protein chưa bị thủy phân bằng trichloacetic acid. ðịnh lượng sản phẩm ñược tạo thành trong
phản ứng bằng phản ứng màu với thuốc thử Folin, kết quả phân tích dựa vào ñồ thị chuẩn
tyrosine.
ðơn vị hoạt ñộ protease là lượng enzyme phân giải protein tạo thành các sản phẩm hòa
tan trong trichloacetic acid tương ứng với một micromol tyrosine (0,181 mg) trong một phút,
ở 300C.
Protease của dịch chiết quả ñược xác ñịnh ở pH 7,2 ± 0,2.
3. Các bước tiến hành
a. Chuẩn bị dung dịch ñệm Britton và Robinson pH 7,2
- Dung dịch A: Acetic acid 0,04M (2,32 ml pha thành 1000 ml), phosphoric acid 0,04M,
boric acid 0,04M.
- Dung dịch B: 8g NaOH hòa tan trong nước cất và dẫn nước ñến 1000 ml.
- Dung dịch ñệm Britton và Robinson có pH khác nhau phụ thuộc vào tỉ lệ pha thể tích
dung dịch A và B. Pha ñệm pH 7,2: lấy 100 ml dung dịch A và 55 ml dung dịch B, dẫn nước
cất ñến 200 ml.
b. Dung dịch casein 2%
Hòa tan 2g casein vào 90 ml ñệm Britton và Robinson pH 7,2. Nếu pH của dung dịch
thấp hơn 7,2 thì dùng vài giọt NaOH 1N ñể ñiều chỉnh, dẫn ñệm ñến 100 ml.
c. Dung dịch enzyme
- Cân 1g ñu ñủ, nghiền với ñệm Britton và Robinson pH 7,2. ðổ dịch nghiền vào bình
ñịnh mức loại 100 ml. Dùng ñệm rửa cối chày, nước rửa cho vào bình ñịnh mức. Bổ sung ñệm
ñến vạch ngấn. Lắc ñều, lọc lấy dịch trong.
- Chuẩn bị dịch enzyme từ dịch lên men vi nấm A. oryzae : Nuôi cấy A. oryzae trong
môi trường dịch thể Czapek−Dox vô trùng (saccharose 30g; NaNO3 3,5g; K2HPO4 1,5g;
MgSO4 0,5g; KCl 0,5g; FeSO4 0,01g rồi thêm 20 ml sữa ñặc hay 10g gelatin, hay casein,
nước cất 1000 ml) trong ñiều kiện nhiệt ñộ phòng trên máy lắc 200 vòng/phút sau 72 giờ thu
lấy dịch lọc.
Do Drive thay đổi chính sách, nên một số link cũ yêu cầu duyệt download. các bạn chỉ cần làm theo hướng dẫn.
Password giải nén nếu cần: ket-noi.com | Bấm trực tiếp vào Link để tải:
You must be registered for see links