Download Luận văn Nghiên cứu xạ khuẩn thuộc chi Streptomyces sinh chất kháng sinh chống nấm gây bệnh trên cây chè ở Thái Nguyên miễn phí
MỤC LỤC
Lời cảm ơn
Lời cam đoan
Mục lục
Những chữ viết tắt
Danh mục các bảng
Danh mục các hình vẽ, đồ thị
MỞ ĐẦU.1
Chƣơng 1: TỔNG QUAN TÀI LIỆU
1.1. GIỚI THIỆU VỀ XẠ KHUẨN.3
1.1.1. Phân bố của xạ khuẩn trong tự nhiên.3
1.1.2. Đặc điểm hình thái của xạ khuẩn.4
1.1.3. Sự hình thành bào tử của xạ khuẩn.5
1.1.4. Cấu tạo của xạ khuẩn.6
1.2. CÁC PHƢƠNG PHÁP PHÂN LOẠI XẠ KHUẨN HIỆN ĐẠI. .8
1.2.1. Đặc điểm hình thái và tính chất nuôi cấy.8
1.2.2. Đặc điểm hóa phân loại (Chemotaxonomy).9
1.2.3. Đặc điểm sinh lý - sinh hóa.10
1.2.4. Phân loại số (Numerical taxonomy).10
1.2.5. Phân loại xạ khuẩn chi Streptomyces.11
1.3. CHẤT KHÁNG SINH TỪ XẠ KHUẨN.12
1.3.1. Lƣợc sử nghiên cứu chất kháng s inh.12
1.3.2. Sự hình thành chất kháng sinh ở xạ khuẩn.15
1.3.3. Các yếu tố ảnh hƣởng đến sinh tổng hợp chất kháng s inh.16
1.4. MỘT SỐ BỆNH HẠI CHÈ DO NẤM GÂY RA VÀ ỨNG DỤNG CỦA
CKS TRONG BẢO VỆ THỰC VẬT.18
1.4.1. Một số bệnh hại chè do nấm.18
1.4.2. Các chất kháng sinh trong bảo vệ thực vật.21
Chƣơng 2 - NGUYÊN LIỆU VÀ PHƢƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU
2.1. Nguyên liệu và hóa chất.24
2.1.1. Nguyên liệu.24
2.1.2. Hóa chất, công cụ và thiết bị. .24
2.2. Phƣơng pháp nghiên cứu.27
2.2.1. Phƣơng pháp phân lập nấm gây bệnh từ các mẫu chè.27
2.2.2. Phân lập và tuyển chọn xạ khuẩn.28
2.2.2.1. Phân lập xạ khuẩn theo Vinogradski.28
2.2.2.2. Xác định hoạt tính kháng s inh .28
2.2.2.3.Tuyển chọn các chủng xạ khuẩn sinh chất kháng sinh.29
2.2.3. Bảo quản giống.29
2.2.4. Nghiên cứu các đặc điểm sinh học và phân loại xạ khuẩn.30
2.2.4.1. Đặc điểm hình thái.30
2.2.4.2. Đặc điểm nuô i cấy.31
2.2.4.3. Đặc điểm sinh lý - sinh hóa.31
2.2.5. Lên men tạo kháng sinh.32
2.2.5.1. Lựa chọn môi trƣờng lên men thích hợp .32
2.2.5.2. Ảnh hƣởng của nguồn cacbon.33
2.2.5.3. Ảnh hƣởng của nguồn Nitơ.33
2.2.6. Các phƣơng pháp sinh học phân tử trong phân lập gen 16S - rRNA.33
2.2.6.1. Tách chiết DNA của xạ khuẩn bằng đệm CTAB.33
2.2.62. Khuếch đại gen 16S - rRNA bằng phản ứng PCR.34
2.2.6.3. Phƣơng pháp điện di trên gel agarose.35
2.2.7. Phƣơng pháp xử lý số liệu.36
Chƣơng 3 - KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN
3.1. Phân lập và thuần khiết các chủng nấm gây bệnh trên chè.37
3.2. Phân lập và tuyển chọn xạ khuẩn.38
3.2.1. Hoạt tính kháng nấm của các chủng xạ khuẩn.38
3.2.2. Tuyển chọn các chủng xạ khuẩn có HTKN cao.41
3.3. Đặc điểm sinh học và đặc điểm phân loại của 2 chủng XK Đ1 và R2.42
3.3.1. Đặc điểm hình thái.42
3.3.2.Đặc điểm nuô i cấy.43
3.3.3. Đặc điểm sinh lý - sinh hóa.45
* Khả năng đồng hóa các nguồn cacbon.45
* Nhiệt độ sinh trƣởng thích hợp .46
* Khả năng chịu muố i.46
* Khả năng sinh enzym ngoại bào.47
3.3.4. Hoạt tính kháng sinh của 2 chủng R2 và Đ1.48
3.3.5. Vị trí phân loại của hai chủng xạ khuẩn R2 và Đ1.50
3.4. Khả năng sinh tổng hợp CKS của 2 chủng xạ khuẩn đã lựa chọn.52
3.4.1. Lựa chọn môi trƣờng lên men thích hợp.52
3.4.2. Ảnh hƣởng của nguồn cacbon.54
3.4.3. Ảnh hƣởng của nguồn nitơ.56
3.5. Phân loại các chủng xạ khuẩn theo phƣơng pháp sinh học phân tử.57
3.5.1. Kết quả tách chiết DNA tổng số của các chủng xạ khuẩn.57
3.5.2. Kết quả nhân gen 16S - rRNA bằng phản ứng PCR.58
Chƣơng 4 - KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ
4.1. Kết luận.60
4. 2. Kiến nghị về những nghiên cứu tiếp theo.61
CÔNG TRÌNH CÔNG BỐ LIÊN QUAN ĐẾN LUẬN VĂN.62
TÀI LIỆU THAM KHẢO.63
tui xin bày tỏ lòng biết ơn sâu sắc tới cô giáo TS. Vi Thị Đoan Chính
đã tận tình giúp đỡ tui trong quá trình thực hiện và hoàn thành luận văn này.
Xin chân thành Thank ThS. Nguyễn Phú Hùng và các cán bộ của bộ
môn Sinh học thuộc Khoa KHTN & XH - ĐHTN đã nhiệt tình giúp đỡ tôi.
Xin chân thành Thank PGS. TS. Ngô Đình Quang Bính và các cán bộ
phòng Di truyền vi sinh học - Viện Công nghệ sinh học thuộc Viện khoa học
và công nghệ Việt Nam.
Xin Thank Ban lãnh đạo Trƣờng Đại học Y - Dƣợc Thái Nguyên,
Khoa Sinh - KTNN, Khoa Sau Đại học - Trƣờng Đại học Sƣ phạm - ĐHTN
đã tạo nhiều điều kiện để tui hoàn thành luận văn này.
Xin Thank Ban chủ nhiệm khoa KHCB, Bộ môn Hóa - sinh đã tạo mọi
điều kiện cho tui đƣợc học tập và hoàn thành luận văn này.
tui xin Thank các thầy cô, bạn bè đồng nghiệp đã động viên, tạo mọi
điều kiện giúp đỡ tui trong suốt quá trình làm luận văn.
Lời Thank sâu sắc nhất tui xin dành cho gia đình và những ngƣời thân
yêu của tôi.
LỜI CAM ĐOAN
tui xin cam đoan đây là công trình nghiên cứu của riêng tôi. Các số
liệu, kết quả nghiên cứu trong luận văn là trung thực và chƣa từng đƣợc công
bố trong bất kỳ công trình nào khác.
Thái nguyên, ngày 15 tháng 9 năm 2008
Tác giả
Bùi Thị Hà
MỤC LỤC
Trang
Trang phụ bìa
Lời Thank
Lời cam đoan
Mục lục
Những chữ viết tắt
Danh mục các bảng
Danh mục các hình vẽ, đồ thị
MỞ ĐẦU..........................................................................................................1
Chƣơng 1: TỔNG QUAN TÀI LIỆU
1.1. GIỚI THIỆU VỀ XẠ KHUẨN..................................................................3
1.1.1. Phân bố của xạ khuẩn trong tự nhiên............................................3
1.1.2. Đặc điểm hình thái của xạ khuẩn..................................................4
1.1.3. Sự hình thành bào tử của xạ khuẩn...............................................5
1.1.4. Cấu tạo của xạ khuẩn....................................................................6
1.2. CÁC PHƢƠNG PHÁP PHÂN LOẠI XẠ KHUẨN HIỆN ĐẠI... ...........8
1.2.1. Đặc điểm hình thái và tính chất nuôi cấy.....................................8
1.2.2. Đặc điểm hóa phân loại (Chemotaxonomy)..................................9
1.2.3. Đặc điểm sinh lý - sinh hóa.........................................................10
1.2.4. Phân loại số (Numerical taxonomy)............................................10
1.2.5. Phân loại xạ khuẩn chi Streptomyces..........................................11
1.3. CHẤT KHÁNG SINH TỪ XẠ KHUẨN.................................................12
1.3.1. Lƣợc sử nghiên cứu chất kháng sinh...........................................12
1.3.2. Sự hình thành chất kháng sinh ở xạ khuẩn..................................15
1.3.3. Các yếu tố ảnh hƣởng đến sinh tổng hợp chất kháng sinh........16
1.4. MỘT SỐ BỆNH HẠI CHÈ DO NẤM GÂY RA VÀ ỨNG DỤNG CỦA
CKS TRONG BẢO VỆ THỰC VẬT..................................................18
1.4.1. Một số bệnh hại chè do nấm......................................................18
1.4.2. Các chất kháng sinh trong bảo vệ thực vật.................................21
Chƣơng 2 - NGUYÊN LIỆU VÀ PHƢƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU
2.1. Nguyên liệu và hóa chất.........................................................................24
2.1.1. Nguyên liệu................................................................................24
2.1.2. Hóa chất, công cụ và thiết bị.................. ...................................24
2.2. Phƣơng pháp nghiên cứu..........................................................................27
2.2.1. Phƣơng pháp phân lập nấm gây bệnh từ các mẫu chè...........................27
2.2.2. Phân lập và tuyển chọn xạ khuẩn..........................................................28
2.2.2.1. Phân lập xạ khuẩn theo Vinogradski........................................28
2.2.2.2. Xác định hoạt tính kháng sinh ................................................28
2.2.2.3.Tuyển chọn các chủng xạ khuẩn sinh chất kháng sinh............29
2.2.3. Bảo quản giống......................................................................................29
2.2.4. Nghiên cứu các đặc điểm sinh học và phân loại xạ khuẩn....................30
2.2.4.1. Đặc điểm hình thái...................................................................30
2.2.4.2. Đặc điểm nuôi cấy....................................................................31
2.2.4.3. Đặc điểm sinh lý - sinh hóa......................................................31
2.2.5. Lên men tạo kháng sinh.........................................................................32
2.2.5.1. Lựa chọn môi trƣờng lên men thích hợp .................................32
2.2.5.2. Ảnh hƣởng của nguồn cacbon..................................................33
2.2.5.3. Ảnh hƣởng của nguồn Nitơ......................................................33
2.2.6. Các phƣơng pháp sinh học phân tử trong phân lập gen 16S - rRNA....33
2.2.6.1. Tách chiết DNA của xạ khuẩn bằng đệm CTAB.....................33
2.2.62. Khuếch đại gen 16S - rRNA bằng phản ứng PCR...................34
2.2.6.3. Phƣơng pháp điện di trên gel agarose......................................35
2.2.7. Phƣơng pháp xử lý số liệu.....................................................................36
Chƣơng 3 - KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN
3.1. Phân lập và thuần khiết các chủng nấm gây bệnh trên chè......................37
3.2. Phân lập và tuyển chọn xạ khuẩn.............................................................38
3.2.1. Hoạt tính kháng nấm của các chủng xạ khuẩn............................38
3.2.2. Tuyển chọn các chủng xạ khuẩn có HTKN cao..........................41
3.3. Đặc điểm sinh học và đặc điểm phân loại của 2 chủng XK Đ1 và R2....42
3.3.1. Đặc điểm hình thái......................................................................42
3.3.2.Đặc điểm nuôi cấy........................................................................43
3.3.3. Đặc điểm sinh lý - sinh hóa.........................................................45
* Khả năng đồng hóa các nguồn cacbon...............................................45
* Nhiệt độ sinh trƣởng thích hợp .........................................................46
* Khả năng chịu muối...........................................................................46
* Khả năng sinh enzym ngoại bào........................................................47
3.3.4. Hoạt tính kháng sinh của 2 chủng R2 và Đ1..............................48
3.3.5. Vị trí phân loại của hai chủng xạ khuẩn R2 và Đ1....................50
3.4. Khả năng sinh tổng hợp CKS của 2 chủng xạ khuẩn đã lựa chọn...........52
3.4.1. Lựa chọn môi trƣờng lên men thích hợp.....................................52
3.4.2. Ảnh hƣởng của nguồn cacbon.....................................................54
3.4.3. Ảnh hƣởng của nguồn nitơ...............................
Last edited by a moderator: