Mở đầu
Chương 1: Tổng quan
Chương 2: Vật liệu và phương pháp
Chương 3: Kết quả và biện luận
Chương 4: Kết luận và đề nghị
Tài liệu tham khảo
Cá tra (Pangasius hypophthalmus) là loài cá có tiềm năng xuất khẩu lớn và
mang lại lợi nhuận cao cho người nuôi. Theo Hiệp hội Chế biến và Xuất khẩu thuỷ
sản Việt Nam (The Vietnam Association of Seafood Exporters and Producers –
VASEP), sản phẩm cá tra Việt Nam đang dẫn đầu thị phần thế giới (2009). VASEP
dự báo, vị trí dẫn đầu thị trường thế giới của Cá tra Việt Nam sẽ còn giữ vững trong
nhiều năm tới. Với tiềm năng kinh tế lớn như vậy, cá tra hiện là một trong những
sản phẩm xuất khẩu chủ lực của Việt Nam. Theo quy hoạch của Bộ Nông Nghiệp &
Phát Triển Nông Thôn, đến năm 2010 sản lượng cá tra là 1,5 triệu tấn, đạt kim
ngạch xuất khẩu 1,5 tỉ USD và đến năm 2020, sản lượng ước đạt 2 triệu tấn, kim
ngạch xuất khẩu 2 tỷ USD.
Một trong những giải pháp quan trọng để nâng cao sản lượng cá tra là nuôi
công nghiệp tập trung với quy mô lớn. Tuy nhiên, việc nuôi cá với mật độ cao tạo
điều kiện cho các bệnh nhiễm khuẩn phát triển và lây lan như bệnh mủ gan, bệnh
đốm đỏ, bệnh do nấm, kí sinh trùng …Trong đó, đã và đang gây thiệt hại nghiêm
trọng nhất là bệnh gan thận mủ do vi khuẩn Edwardsiella ictaluri gây ra. Khi cá bị
nhiễm bệnh, tỷ lệ chết có thể lên đến 90%. Để điều trị bệnh, người nuôi thường sử
dụng thuốc hóa học và một số loại kháng sinh. Tuy nhiên, việc sử dụng thuốc và
hóa chất không đúng qui định và lặp đi lặp lại trong thời gian dài đã dẫn đến tình
trạng kháng thuốc và hiệu quả không cao. Hơn nữa, lượng tồn dư kháng sinh trong
cá không chỉ ảnh hưởng tới chất lượng của sản phẩm, mà còn ảnh hưởng đến sức
khỏe của người tiêu dùng. Để giải quyết vấn đề trên, biện pháp sử dụng vaccine
phòng bệnh được đánh giá là có hiệu quả, ít tốn kém và đảm bảo an toàn sinh học.
Do đó, việc tìm kiếm các loại vaccine cho cá tra kháng lại các bệnh nhiễm
khuẩn đang là vấn đề cấp bách cho công nghiệp nuôi cá tại Việt Nam.
Đối với vi khuẩn E. ictaluri, O antigen được chứng minh là một kháng
nguyên mạnh và là yếu tố gây độc quan trọng. Chiều dài chuỗi O antigen được điều
hòa bởi gen wzz (length chain determinant gene). Nghiên cứu ở các loài vi khuẩn
Gram âm khác như E. coli, Samonella, Yersinia… cho thấy khi chủng vi khuẩn đột Trần Thị Thanh Thanh Luận văn Thạc sĩ Sinh học
Trang 2
biến gen wzz thì O antigen sẽ phân bố chiều dài chuỗi một cách ngẫu nhiên và có
độc tính thấp hơn so với chủng hoang dại.
Từ những thực tiễn nêu trên, chúng tui thực hiện đề tài “Tạo chủng
Edwardsiella ictaluri đột biến gen wzz bằng phương pháp knockout gen” nhằm làm
cơ sở cho việc sản xuất vaccine nhược độc phòng bệnh cho cá tra.
Mục tiêu của đề tài
- Tạo chủng E. ictaluri đột biến gen wzz bằng phương pháp knockout gen.
Nội dung đề tài bao gồm
- Tạo dòng đoạn gen wzz của E. ictaluri trong E. coli DH5α.
- Tạo chủng E. ictaluri mang plasmid pKD46.
- Tạo chủng E. ictaluri đột biến gen wzz bằng phương pháp 1 STEP.
- Tạo chủng E. ictaluri đột biến gen wzz bằng phương pháp 2 STEP.
- Tạo chủng E. ictaluri đột biến gen wzz bằng phương pháp sử dụng
suicide plasmid pGP704.
- Loại bỏ plasmid pKD46 ra khỏi chủng E. ictaluri đột biến gen wzz
