Download miễn phí Nghiên cứu định danh tác nhân bệnh đốm lá vi khuẩn cây cải ngọt
Trên môi trường PDA, sau 48 giờ có sự khác nhau về sinh trưởng của các dòng vi khuẩn gây bệnh đốm lá cải ngọt. Hầu hết các dòng đều sinh trưởng phát triển mạnh ở nhiệt độ 30oC; ở 20oC vi khuẩn mọc chậm hơn và ngừng sinh trưởng phát triển hoàn toàn ở nhiệt độ 40oC trở lên. Trong thí nghiệm này, nếu kích thước đốm khuẩn lạc lớn hơn được xem là có sự sinh trưởng phát triển (hình bìa 2-6b); nếu đốm khuẩn lạc không thay đổi so với ban đầu hay lớn hơn chút ít được xem là sinh trưởng chậm (hình bìa 2-6a) và nếu đốm khuẩn lạc không mọc thì được coi là ngừng sinh trưởng phát triển (hình bìa 2-6c).
Để tải bản Đầy Đủ của tài liệu, xin Trả lời bài viết này, Mods sẽ gửi Link download cho bạn sớm nhất qua hòm tin nhắn.
Ai cần download tài liệu gì mà không tìm thấy ở đây, thì đăng yêu cầu down tại đây nhé:
Nhận download tài liệu miễn phí
Tóm tắt nội dung tài liệu:
Nghiên cứu định danh tác nhânbệnh đốm lá vi khuẩn cây cải ngọt
IDENTIFICATION PATHOGEN CAUSED BACTERIAL LEAF SPOT DISEASE
ON CHINENSISE CABBAGE (Brassica sinensis)
Hoàng Xuân Quang1, Trần Văn Kỳ(1),
Nguyễn Văn Lẫm2, Lê Đình Đôn2
Abstract
1. Viện KHKTNN Miền Nam;
2. Đại học Nông Lâm Tp. HCM
Bacterial leaf spot was one the most important disease which caused severely loss to yield of chinensise cabbage (Brassica sinensis) in Hồ Chí Minh city. The disease symptom is often water-soaked spot on lesion margin of abaxial leaf surface. The identification of bacterial strains was followed by Schaad (1988) including experiments of Gram stain, color colonies on YDC medium and MS medium, growth at 35oC, gelatin hydrolysis, protein digestation on skimmed-milk, acid production from arabinose, mannose, and glucose. The result indicated that bacteria were belong to negative Gram group. Colonies were convex, entire margin and yellow on YDC medium and. The bacteria were fast growth between 25-35oC but not growth above 35oC and slow growth below 200C. The bacteria were able to growth on MS medium with blue colonies, gelatin hydrolysis, protein digestation with clear zone around the colonies. Yellow color around colonies on medium C of dye was a consequence of acidification activities of bacteria on arabinonse, manose and glucose. The causal agent of leaf spot disease on chinensise cabbage caused by Xanthomonas campestris.
I. ĐặT VấN đề
Cải ngọt (Brassica sinensis L.) được coi là cây rau ăn lá chủ lực ở Tp.HCM và một số tỉnh phụ cận. Bệnh đốm lá vi khuẩn là nguyên nhân chính gây tổn thất đến năng suất rau của những năm gần đây. Triệu chứng của bệnh là các đốm bệnh xuất hiện trên rải rác trên lá (hình bìa 2-1). Tác nhân gây bệnh đốm lá trên cải bắp, cải rổ ở Mỹ được xác định là do các dòng vi khuẩn Xanthomonas campestris pv. armoraciae (Lowell, 2001; Gaetan và Lopez, 2005). Youfu và ctv (2002) cho rằng bệnh đốm lá cây súp lơ ở Mỹ do Psedomonas syringae pv. maculicola. Theo Vicente và ctv (2006), bệnh đốm lá vi khuẩn họ hoa thập tự là do các vi khuẩn Xanthomonas campestris pv. raphani và Xanthomonas campestris pv. armoraciae, Xanthomonas campestris pv. campestris gây nên. Phạm Văn Biên và Mai Thị Vinh (1985) đã xác định bệnh đốm lá súp lơ ở Bình Chánh (Tp.HCM) là do vi khuẩn Pseudomonas sp. gây nên. Nghiên cứu này là xác định tên loài của tác nhân gây bệnh đốm lá trên cây cải ngọt ở Tp. HCM.
II. VẬT LIỆU
VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU
Mẫu bệnh đốm lá được thu thập từ Củ Chi, Hoóc Môn và quận 12 Tp.HCM. Vi khuẩn từ các mẫu bệnh mới được phân lập trên môi trường PDA. Xác định vi khuẩn gây bệnh theo quy tắc Koch. Việc định danh đến giống và loài vi khuẩn gây bệnh bằng các phản ứng sinh lý, sinh hóa được thực hiện theo phương pháp của Schaad (1988). Cụ thể: nhuộm Gram, đặc tính khuẩn lạc trên môi trường YDC agar, môi trường MS, sự hóa lỏng Gelatin, sự phân giải sữa mất chất béo trên môi trường YNA, phản ứng tạo axít từ nguồn hyđrat carbon trên môi trường Dye’s C và khoảng nhiệt độ sinh trưởng, nhiệt độ tối cao, tối thấp của vi khuẩn gây bệnh.
III. KếT QUả Và THảO LUậN
Phân lập vi khuẩn gây bệnh
Trên môi trường PDA, khuẩn lạc của vi khuẩn từ mẫu lá bệnh có mầu vàng tròn, hơi lồi, bề mặt nhẵn bóng và rìa nhẵn (hình bìa 2-2).
Phản ứng nhuộm Gram của khuẩn lạc phân lập từ đốm lá cải ngọt
Kết quả nhuộm Gram cho thấy khuẩn lạc có màu đỏ tươi (hình bìa 2 - 3A), khác biệt rõ so với mầu tím của vi khuẩn Gram dương Bacillus subtilis (Hình bìa 3 - 3B). Theo Schaad (1988), vi khuẩn nhuộm Gram âm thường có màu hồng hay đỏ tươi và vi khuẩn nhuộm Gram dương có mầu tím hay xanh đen, kết luận này cũng tương tự Jame và ctv (1992). Như vậy vi khuẩn khuẩn gây bệnh đốm lá cải ngọt thuộc nhóm Gram âm.
Phản ứng của vi khuẩn gây bệnh đốm lá cải ngọt trên các môi trường nuôi cấy khác nhau
Nhóm vi khuẩn Gram (-) gây bệnh cho cây trồng gồm các giống Pseudomonas, Xanthomonas, Erwinia, và Agrobacterium. Theo Schaad (1988), sử dụng môi trường YDC để phân biệt các giống trên là phù hợp. Sau cấy 48 giờ ở nhiệt độ 28oC thấy rằng khuẩn lạc của các dạng vi khuẩn có màu vàng trên môi trường này (hình bìa 2-4). Như vậy, vi khuẩn gây bệnh đốm lá cải ngọt có thể là Xanthomonas hay Erwinia. Kết quả này phù hợp với Vauterin và ctv (1995) khi nghiên cứu bệnh đốm lá sắn do vi khuẩn Xanthomonas gây nên.
Để phân biệt hai giống Xanthomonas và Erwinia, vi khuẩn được cấy trên môi trường MS. Đây là môi trường có tính chọn lọc cao để phân biệt vi khuẩn thuộc họ Enterobacteriaceae (Schaad, 1988). Trong điều kiện pH của môi trường là 7,4 và nhiệt độ 28oC, sau cấy 48 giờ thì khuẩn lạc của vi khuẩn gây bệnh đốm lá cải ngọt và vi khuẩn Xanthomonas campestris pv. citri đều có màu hơi xanh. Trong khi đó, vi khuẩn Erwinia spp. gây bệnh thối nhũn cây cải ngọt có mầu vàng da cam (hình bìa 2-5).
Như vậy, có thể khẳng định rằng bệnh đốm lá cải ngọt do vi khuẩn giống Xanthomonas gây nên.
ảnh hưởng của nhiệt độ đến sinh trưởng phát triển của vi khuẩn gây bệnh đốm lá cải ngọt
Trên môi trường PDA, sau 48 giờ có sự khác nhau về sinh trưởng của các dòng vi khuẩn gây bệnh đốm lá cải ngọt. Hầu hết các dòng đều sinh trưởng phát triển mạnh ở nhiệt độ 30oC; ở 20oC vi khuẩn mọc chậm hơn và ngừng sinh trưởng phát triển hoàn toàn ở nhiệt độ 40oC trở lên. Trong thí nghiệm này, nếu kích thước đốm khuẩn lạc lớn hơn được xem là có sự sinh trưởng phát triển (hình bìa 2-6b); nếu đốm khuẩn lạc không thay đổi so với ban đầu hay lớn hơn chút ít được xem là sinh trưởng chậm (hình bìa 2-6a) và nếu đốm khuẩn lạc không mọc thì được coi là ngừng sinh trưởng phát triển (hình bìa 2-6c).
Theo Lê Lương Tề và Vũ Triệu Mân (1999), đại bộ phận vi khuẩn có nhiệt độ thích hợp từ 20 - 30oC, tối đa khoảng 35 - 37oC. Như vậy, vi khuẩn gây bệnh đốm lá cải ngọt thuộc nhóm ưa nhiệt trung bình. Theo Schaad (1988), vi khuẩn gây bệnh cây thuộc giống Xanthomonas có 3 loài campestris, albilineans và axonopodis có khả năng sinh trưởng phát triển ở nhiệt độ 35oC. Do đó, loài vi khuẩn gây bệnh đốm lá cải ngọt có thể là một trong ba loài trên.
Sự hoá lỏng Gelatin của vi khuẩn
Sau 48 giờ nuôi cấy ở điều kiện 25oC và khi nhuộm môi trường bằng dung dịch HgCl2 thì vòng phân giải trong suốt xuất hiện xung quanh khuẩn lạc của vi khuẩn gây bệnh đốm lá cải ngọt và dòng đối chứng Xanthomonas campestris pv. citri. Như vậy, đã xảy ra phản ứng hoá lỏng Gelatin của vi khuẩn gây bệnh đốm lá cải ngọt (Hình bìa 2-7).
Theo Schaad (1988), trong các loài vi khuẩn gây bệnh cây giống Xanthomans, chỉ có 2 loài Xanthomonas campestris và Xanthomonas fragariae gây hoá lỏng Gelatin. Như vậy, vi khuẩn gây bệnh đốm lá cải ngọt là một trong hai loài trên.
Sự phân giải sữa mất chất béo
Với phương pháp cấy vi khuẩn thành điểm trên môi trường đặc chứa sữa mất chất béo, ở nhiệt độ 28oC sau 48 giờ thì vòng phân giải hình thành xung quanh khuẩn lạc của vi khuẩn gây bệnh đốm lá cải ngọt và dòng đối chứng Xanthomonas campestris pv. citri. Điều này chứng tỏ có sự hoạt động của enzyme protease của vi khuẩn gây bệnh đốm lá cải ngọt (hình bìa 2-8). Theo Ahaad (1988) và Goszczynska (2000), chỉ có vi khuẩn loài X. campestris có khả năng thuỷ phân protein, các loài khác thuộc giống Xanthomonas gây bệnh cây không thuỷ phân protein.
Như vậy, vi khuẩn gây bệnh đốm lá cải ngọt thuộc loài Xant...